ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，已知濃度的規(guī)范品、不知道濃度的樣品參加微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢查。先將生物素符號(hào)的抗體一起溫育。洗刷后，參加親和素符號(hào)過的HRP。再通過溫育和洗刷，去掉未的酶物，然后參加底物A、B，和酶物一起效果。產(chǎn)生色彩。ELISA試劑盒色彩的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
 

　　ELISA試劑盒的使用方法：
 

　　一、雙抗體夾心法
 

　　1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌，下同)。
 

　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
 

　　3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
 

　　4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
 

　　5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
 

　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
 

　　二、間接法
 

　　1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；
 

　　2.次日洗滌3次；
 

　　3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；
 

　　4.(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)二抗體(抗抗體)0.1ml；
 

　　5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
 

　　6.較后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。